RESUMO
Several hepatitis B virus (HBV)-related factors, including the viral load, genotype, and genomic mutations, have been linked to the development of liver diseases. Therefore, in this study we aimed to investigate the influence of HBV genetic variability during acute and chronic infection phases. A real-time nested PCR was used to detect HBV DNA in all samples (acute, n = 22; chronic, n = 49). All samples were sequenced for phylogenetic and mutation analyses. Genotype A, sub-genotype A1, was the most common genotype in the study population. A total of 190 mutations were found in the pre-S/S gene area and the acute profile revealed a greater number of nucleotide mutations (p < 0.05). However, both profiles contained nucleotide mutations linked to immune escape and an increased risk of hepatocellular carcinomas (acute, A7T; chronic, A7Q). Furthermore, 17 amino acid substitutions were identified in the viral polymerase region, including the drug resistance mutations lamivudine and entecavir (rtL180M), with statistically significant differences between the mutant and wild type strains. Owing to the natural occurrence of these mutations, it is important to screen for resistance mutations before beginning therapy.
Assuntos
Hepatite B Crônica , Hepatite B , Proteína S/genética , Brasil/epidemiologia , DNA Viral/genética , Farmacorresistência Viral/genética , Genótipo , Vírus da Hepatite B/genética , Humanos , Lamivudina/uso terapêutico , Mutação , Nucleotídeos , FilogeniaRESUMO
The Brazilian Amazon Region is a highly endemic area for hepatitis B virus (HBV). However, little is known regarding the genetic variability of the strains circulating in this geographical region. Here, we describe the first full-length genomes of HBV isolated in the Brazilian Amazon Region; these genomes are also the first complete HBV subgenotype D3 genomes reported for Brazil. The genomes of the five Brazilian isolates were all 3,182 base pairs in length and the isolates were classified as belonging to subgenotype D3, subtypes ayw2 (n = 3) and ayw3 (n = 2). Phylogenetic analysis suggested that the Brazilian sequences are not likely to be closely related to European D3 sequences. Such results will contribute to further epidemiological and evolutionary studies of HBV.
Assuntos
Humanos , Carcinoma Hepatocelular , Movimento Celular/fisiologia , Neoplasias Hepáticas , Metaloproteinase 9 da Matriz/genética , Transdução de Sinais/fisiologia , Inibidor Tecidual de Metaloproteinase-1/genética , Linhagem Celular Tumoral/citologia , Linhagem Celular Tumoral/fisiologia , Colagenases/genética , Dipeptídeos/farmacologia , Inibidores de Metaloproteinases de Matriz , Metaloproteinase 1 da Matriz/genética , /genética , /genética , /genética , Inibidores de Proteases/farmacologia , Transdução de Sinais/efeitos dos fármacos , TransfecçãoRESUMO
Introdução: O vírus da hepatite B (HBV) é classificado em oito genótipos (A-H), que apresentam uma distribuição geográfica característica nas diferentes regiões do mundo. No Brasil, são encontrados principalmente os genótipos A, D e F. A infecção pelo HBV é comumente diagnosticada pela presença do antígeno de superfície viral (HBsAg) no soro de indivíduos infectados. Mutações no HBsAg podem afetar os níveis de secreção deste antígeno, bem como, alterar a sua conformação, e conseqüentemente, inibir a sua detecção pelos testes imunoenzimáticos. A detecção do DNA viral em pacientes com sorologia negativa para o HBsAg caracteriza a ocorrência de infecção oculta pelo HBV. Partículas híbridas de HBsAg, também denominadas quimeras, têm sido utilizadas com bastante eficiência na apresentação de epítopos exógenos. Objetivos: Realizar estudos de expressão in vitro do HBsAg em células eucarióticas visando (i) associar infecção oculta pelo HBV com mutações de aminoácidos no HBsAg; (ii) avaliar possíveis diferenças na detecção do HBsAg relacionadas aos diferentes genótipos do HBV; e (iii) possibilitar a construção de quimeras de HBV e do vírus da hepatite C (HCV) para produção de proteínas híbridas imunizantes. Metodologia: A clonagem das regiões genômicas do envelope do HBV foi realizada utilizando-se os vetores de expressão em células eucarióticas pcDNA3 e/ou pCI. Para a inserção do segmento de HCV no HBsAg, foi utilizado um sítio de restrição natural localizado na região do epítopo neutralizante do HBsAg. Ensaios de transfecção transitória foram realizados em células CHO e/ou HuH7. O meio de cultura e os extratos celulares foram analisados quanto à detecção de HBsAg por ensaios imunoenzimáticos. Ensaios de imunofluorescência, utilizando um anticorpo monoclonal anti-HBs, foram realizados para detectar a localização intracelular do HBsAg. Resultados: 1) A infecção oculta pelo HBV foi detectada em 6/43 (14por cento) pacientes infectados pelo HIV. A ocorrência de...HBsAg.